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    pcr實驗室建設(shè)規(guī)劃要點

    發(fā)布時間: 2021-06-07  點擊次數(shù): 1428次

    PCR實驗室又叫基因擴(kuò)增實驗室,是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過DNA基因追蹤系統(tǒng),能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量,其精確度高達(dá)納米級別。博泰小編帶大家了解pcr實驗室建設(shè)規(guī)劃的要點有哪些。

     

    一、PCR實驗室建設(shè)規(guī)劃要點

    1、主體結(jié)構(gòu): 

    主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內(nèi)所有陰角、陽角均采用鋁合金50內(nèi)圓角鋁,從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。結(jié)構(gòu)牢固,線條簡明,美觀大方,密封性好。

    2、標(biāo)準(zhǔn)的三區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié):

    將PCR過程分成試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本制備和PCR擴(kuò)增檢測三個獨(dú)立的實驗區(qū)。整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊。每個獨(dú)立實驗區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū),同時各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié),使整個PCR實驗過程中試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的污染并降低擴(kuò)增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。可打開緩沖區(qū)Ⅰ,緩沖區(qū)Ⅱ和 PCR 擴(kuò)增區(qū)的排風(fēng)扇往外排氣,在實驗區(qū)的外墻上和各扇門上都安裝有風(fēng)量可調(diào)的回風(fēng)口,空氣通過回風(fēng)口向室內(nèi)換氣。

    3、消毒:

    在三個實驗區(qū)和三個緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈,供消毒用。

    在試劑準(zhǔn)備區(qū)和標(biāo)本制備區(qū) 還設(shè)置移動紫外線燈,對實驗桌進(jìn)行局部消毒。

    4、機(jī)械連鎖不銹鋼傳遞窗:

    試劑和標(biāo)本通過機(jī)械連鎖不銹鋼傳遞窗傳遞,保證試劑和標(biāo)本在傳遞過程中不受污染。 

    5、地面

    地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面,整體性好。便于進(jìn)行清掃,耐腐蝕。沒有條件的也可采用水磨石地面,或大塊的瓷磚接縫需要小于2mm。

    6、照明

    燈具要選用凈化燈具,能達(dá)到便于清洗、不積塵的特點。在建設(shè)的過程中應(yīng)注意:

    1、規(guī)范的安裝流程和全面的服務(wù)流程。 

    2、嚴(yán)格按照規(guī)范科學(xué)設(shè)計的安裝流程。

    3、安裝前需要確定以下安裝條件,如:電源電壓,電源進(jìn)線位置,電話網(wǎng)絡(luò)線進(jìn)線位置,進(jìn)水水壓,地面平整度,通風(fēng)孔、進(jìn)水管和下水管的位置等,理想狀態(tài)的空間尺寸和通風(fēng)口尺寸。

     

    二、設(shè)計要點

    PCR實驗室可以是分散形式,也可以是組合形式。完成一組PCR實驗,通常應(yīng)經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴(kuò)增及產(chǎn)物分析四個實驗過程,若實驗工藝需要,還應(yīng)增加樣品粉碎過程。

    1、分散形式PCR實驗室

    所謂分散形式PCR實驗室,是指完成上述實驗過程的實驗用房彼此相距較遠(yuǎn),呈分散布置形式。對于這種布置形式的PCR實驗室,由于各個實驗之間不易相互干擾,因此無需特殊條件要求。

    2、組合形式PCR實驗室

    所謂組合形式PCR實驗室,是指完成PCR四個實驗過程的實驗用房相鄰布置,組成獨(dú)立實驗區(qū)域的形式。對于組合形式PCR實驗室,由于各個實驗間集中布置,容易造成相互干擾,因此,對總體布局以及屏障系統(tǒng)具有一定的要求。各室在入口處設(shè)緩沖間,以減少室內(nèi)外空氣交換。

     

    三、主要設(shè)備試劑準(zhǔn)備區(qū) 

    儀器設(shè)備主要有冰箱、超凈臺、加樣器、混勻器、天平和離心機(jī)等,加樣器、天平除了要專用外,還應(yīng)有定期校準(zhǔn)。試劑分裝應(yīng)在超凈臺中進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)混合液應(yīng)使用分子生物學(xué)級的,試劑制備好后應(yīng)有質(zhì)檢:是否有污染、是檢測試劑的擴(kuò)增效果。

    1、標(biāo)本制備區(qū) 

    儀器設(shè)備主要有生物安全柜、加樣器、離心機(jī)、溫育儀、混勻器等 

    2、擴(kuò)增區(qū) 

    擴(kuò)增區(qū)的主要儀器是核酸擴(kuò)增儀、超凈臺、微量加樣器、離心機(jī)、可移動紫外燈。擴(kuò)增儀需進(jìn)行校準(zhǔn)。并配備UPS電源,以防止由于電壓的波動,停電對擴(kuò)增效果的影響。

    3、分析區(qū) 

    本區(qū)所使用的儀器設(shè)備有酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、加樣器和水浴箱等 潔凈實驗區(qū)的緩沖間部分面積不能超過主實驗室的八分之一,這是有規(guī)定的。 

     

    四、不可忽略的設(shè)計

    1.實驗室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計及壓力控制 

    PCR實驗室并沒有嚴(yán)格的凈化要求,但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。

    2.污染的預(yù)防與控制  

    PCR實驗室設(shè)計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中,常見的有以下幾種污染類型:擴(kuò)增產(chǎn)物的污染;天然基因組DNA的污染;試劑的污染以及標(biāo)本間的污染。由于一旦發(fā)生污染,實驗就必須停止,直到找到污染源為止,而且實驗結(jié)果必須作廢,需重新進(jìn)行實驗。所以發(fā)生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣,浪費(fèi)人力物力。因此要避免污染,先應(yīng)是預(yù)防,而不是排除。

     

    五、*的嚴(yán)格管理

    1、嚴(yán)格控制進(jìn)出實驗室的人員。與實驗無關(guān)的人員不得隨意進(jìn)出實驗室,有條件的情況下要設(shè)置獨(dú)立的通道和進(jìn)出整個實驗區(qū)的門; 

    2、盡量減少在實驗區(qū)內(nèi)不必要的走動以減少交叉污染的可能性。 

    3、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)是主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源,廢液不能在實驗室中傾倒,必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠(yuǎn)離實驗室的地方棄掉,用過的吸頭等一次性材料也應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理,如焚燒等; 

    4、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì),應(yīng)特別注意實驗人員的安全防護(hù)。 

     

     

     

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